★ 无菌接种操作★
培养基经高压灭菌后，用经过灭菌的工具（如接种针和吸管等）在无菌条件下接种含菌材料（如样品、菌苔或菌悬液等）于培养基上，这个过程叫做无菌接种操作。
在实验室检验中的各种接种必须是无菌操作。
★ 微生物检验过程中的无菌操作要求★
(1)在操作中不应有大幅度或快速的动作；
(2)使用玻璃器皿应轻取轻放；
(3)在正火焰上方操作；
(4)接种用具在使用前、后都必须灼烧灭菌；
(5)在接种培养物时，协作应轻、准；
(6)不能用嘴直接吸吹吸管；
(7)带有菌液的吸管、玻片等器材应及时置于盛有5%来苏尔溶液的消毒桶内消毒。
★ 常用的接种方法★
斜面接种
1、在肉膏蛋白胨斜面试管上，用记号笔写上将接种的菌名、日期和接种者。
2、点燃酒精灯或煤气灯。
3、将菌种试管和待接种的斜面试管，用大拇指和食指、中指、无名指握在左手中，并将中指夹在两试管之间，使斜面向上，成水平状态，在火焰边用右手松动试管塞，以利于接种时拔出。
4、右手拿接种环通过火焰烧灼灭菌（参照实验一），在火焰边用右手的手掌边缘和小指，小指和无名指分别夹持棉塞（或试管帽），将其取出，并迅速烧灼管口。
5、将灭菌的接种环伸入菌种试管内，先将环接触试管内壁或未长菌的培养基，达到冷却的目的，然后再挑取少许菌苔。将接种环退出菌种试管，迅速伸入待接种的斜面试管，用环在斜面上自试管底部向上端轻轻地划直线，勿将培养基划破，也不要使环接触管壁或管口。
6、接种环退出斜面试管，再用火焰烧管口，并在火焰边将试管塞塞上。将接种环逐渐接近火焰，再烧灼。如果接种环上沾的菌体较多时，应先将环在火焰边烤干，然后烧灼，以免未烧死的菌种飞溅出污染环境，接种病原菌时更要注意此点。
斜面接种示意图
划线接种
划线接种可使混合的细菌呈单个分散生长，形成单个菌落，以便获得纯菌、活菌计数。
接种示意图
A斜线法：用接种环以无菌操作挑取菌悬液一环，先在平板培养基的一边作第一次平行划线3-4条，再转动培养皿70°角，并将接种环上剩余物烧掉，待冷却后通过第一次划线部分作第二次平行划线，再用同法通过第二次平行划线部分作第三次平行划线和第四次平行划线。
B曲线法：将挑取有样品的接种环在平板培养基上作连续划线。
液体培养基接种
向肉膏蛋白胨液体培养基中接种少量菌体时，其操作步骤基本与斜面接种时相同，不同之处是挑取菌体的接种环放入液体培养基后，应在液体表面处的管内壁上轻轻磨擦，使菌体从环上脱落，混进液体培养基，塞好试管塞后，摇动液体，使菌体在液体中分布均匀，或用试管振荡器混匀。
向液体培养基中接种量大或要求定量接种时，可将无菌水或液体培养基注入菌种试管，用接种环将菌苔刮下，再将菌种悬液以无菌吸管定量吸出加入，或直接倒入液体培养基。如果菌种为液体培养物，则可用无菌吸管定量吸出加入或直接倒入液体培养基。整个接种过程都要求无菌操作。
接种示意图
穿刺接种
用接种针挑取菌种（针必须挺直），自培养基的中心垂直地刺入半固体培养基中，直至接近管底，但不要穿透，然后沿原穿刺线将针拔出，塞上试管塞，烧灼接种针。
用于厌气性细菌培养、检查细菌的运动能力、保藏菌种。只适宜于细菌和酵母的接种培养。
★ 小 结★
将已接种的斜面、液体和半固体培养基放置28—30℃温箱，培养2—3天后取出观察结果。
上述几种接种法的无菌操作，微生物检验员均匀熟练掌握。应在平日反复练习无菌操作接种技术，直至较熟练地掌握，如在操作中有其他问题，可求助悟空检测服务技术团队指导~
